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节前再学习一波!细胞培养之支原体检测

发布时间:2024-04-19
当培养中的细胞生长缓慢,漂浮物增多时就有必要做支原体检测。对于珍贵的细胞可以做到早发现,早抢救!
  • 支原体简介

  1. 何为支原体:支原体是目前发现的最小的最简单的原核生物,直径50-300nm,基因数量为480,wei一可见的细胞器只有核糖体。于1898年Nocard等发现并命名,不仅能在无生命的人工培养基上生长繁殖,能通过细菌滤器。

  2. 支原体分布:支原体存在于我们身体很多地方,如眼睛,鼻孔,肛门,口腔,阴道等都存在支原体。


  • 支原体对细胞的影响

粘附于宿主细胞表面的支原体从细胞吸收营养,从细胞膜获得胆固醇等脂质,引起细胞损伤。在细胞培养中大多细胞表现为分泌物增多、细胞破碎、生长缓慢,严重者导致细胞死亡。
此外,支原体代谢产生的有毒物质,如溶神经支原体能产生神经毒素,引起细胞膜损伤;有的支原体含有尿素酶,可以水解尿素产生大量氨,对细胞有毒害作用。
当培养中的细胞生长缓慢,漂浮物增多时就有必要做支原体检测。对于珍贵的细胞可以做到早发现,早抢救!

图1:支原体污染严重,导致细胞死亡


三、支原体检测步骤
1、试剂与耗材:包括引物、DNA聚合酶、去离子水、移液器头、PCR管。
2、模板:细胞培养48 h后的培养基沸水浴10min,取上清即可
3、PCR扩增:将反应体系配好混匀,选择合适的程序进行扩增。
4、琼脂糖糖凝胶电泳(如下图)
阴性,DNA条带出现;
阳性,引物1有大小约187 bp的DNA条带出现;引物2有大小约205bp的DNA条带出现。


灵赋拓普支原体检测优势:
(1)精准:采用经典的PCR法,能够检测极微量的样品,并且条带单一,清晰无杂带;
(2)检测范围广:我们采用2对引物分别来检测,可检测二百多种支原体,涵盖细胞培养遇见的所有常见种类;
(3)高效:收到样品2天内即可出具实验报告。